JURNAL PRAKTIKUM KIMIA ORGANIK 1
PERCOBAAN 08

JURNAL KROMATOGRAFI LAPIS DAN KOLOM

DISUSUN OLEH:

NAMA: RADIAH

NIM: A1C118005

         KELAS: REGULER A 2018

DOSEN PENGAMPU:

Dr. Drs. SYAMSURIZAL, M.Si

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS JAMBI

2020

PERCOBAAN KE 08

I.                    JUDUL                               : KROMATOGRAFI LAPIS DAN KOLOM

II.                 HARI, TANGGAL            : RABU, 29 APRIL 2020

III.              TUJUAN PERCOBAAN   :

Adapun tujuan dari percobaan ini adalah

1.      Dapat memahami teknik-teknik dasar kromatografi lapis tipis dan kolom

2.      Dapat membuat pelat kromatografi lapis tipis dan kolom kromatografi

3.      Dapat memisahkan suatu senyawa dari campurannya dengan kromatografi lapis tipis dan memurnikannya dengan kolom

4.      Dapat memisahkan pigmen tumbuhan dengan cara kromatografi kolom

IV.              PRINSIP TEORI

Kromatografi adalah salah satu teknik dalam kimia organic yang digunakan dalam memisahkan campuran zat menjadi komponen-komponennya. Kromatografi dapat dibedakan menjadi beberapa jenis diantaranya kromatografi lapis tipis, kromatografi cair, kromatografi gas, kromatografi penukar ion, dan kromatografi afinitas. Dimana semua jenis teknik kromatografi ini mempunyai prinsip yang sama. Sebelum kita menggunakan teknik kromatografi, kita harus mengenal beberapa istilah yang berkaitan dengan kromatografi yaitu:

Istilah Penting	Pengertian
Fasa Gerak or pengemban	Pelarut yang mengalir didalam kolom atau lapisan tipis khroamtogram
Fasa diam or adsorben	Zat padat yang mengisi kolom atau melekat atau menempel pada lapisan plat atau kaca atau kertas baik berupa silika gel, selulosa, atau okta dodesil sulfat yang lazim tergantung jenis khromatografinya.
Eluen	Campuran pelarut yang dialirkan kedalam kolom atau merambat pada lapis tipis atau kertas
Eluat	Cairan yang keluar dari kolom yang membawa komponen tertentu dari campuran zat yang akan dipisahkan.
Elusi	Proses memisahkan komponen tertentu dari suatu campuran melalui kolom khromatografi dengan menggunakan kombinasi pelarut tertetnu.
Analit	Komponen-komponen Campuran yang  telah memisah melalui proses khromatografi.

Prinsip pemisahan dari kromatografi itu sendiri adalah komponen penyusun suatu zat terletak berdasarkan afinitas atau gaya adesi dari setiap jenis analit terhadap fase gerak dan fase diam sehingga komponen didalamnya dapat dipisahkan satu sam lain. Daya adsorpsi terhadap fase diam akan menentukan afinitas suatu analit  serta kelarutan analit terhadap fase diam yang dipakai. Semakin kuat adsopsi suatu analit terhadap fase diam maka akan semakin kecil kelarutan terhadap fase gerak dan waktu menetapnya dalam kolom akan semakin lama dibandingkan dengan analit yang adsorpsinya lemah (http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan-khromatografi/).

Dalam proses kromatografi, campuran senyawa bisa dipisahkan menjadi komponennya berdasarkan pendistribusian zat antara dua fase, ialah fase diam (stasioner) dan fase gerak (mobile). Kromatografi memiliki azaz penting yaitu senyawa yang berbeda memiliki koefisien distribusi yang berbeda pula diantara kedua fase tersebut. Jika senyawa tersebut berinteraksi lemah dengan fase diam akan lebih lama menetap dalam fase gerak dan akan bergerak dengan cepat dalam system kromatografi. Sebaliknya, senyawa yang berinteraksi kuat dengan fase diam maka akan bergerak dengan lambat. Setiap Komponen yang berada didalam campuran senyawa akan bergerak dengan kecepatan yang berbeda dalam system kromatografi sehingga dapat menghasilkan pemisahan yang sempurna. Metode kromatografi ini dapat dipakai untuk menganalisis secara kualitatif maupun kuantitatif.

Pada kromatografi lapis tipis (TLC), bahan penjerap dilengketkan pada plat kaca, aluminium maupun plastic. Dibandingkan dengan teknik kromatografi lainnya. Teknik ini mempunyai beberapa kelebihan diantaranya prosesnya berlangsung sangat cepat, keperluan bahan bisa disesuaikan dengan keperluan dari pemisahannya baik (Tim Kimia Organik I, 2016).

Kromatografi kolom ialah kromatografi yang didalamnya menggunakan kolom, kolom Ini digunakan sebagai alat untuk memisahkan kompenen-komponen dari campurannya. Alat yang dimaksud meliputi pipa gelas yang dilengkapi dengan kran pada bagian bawah kolom, hal ini bertujuan untuk mengendalikan aliran zat cair tersebut dan ukuran kolom itu tergantung dari banyaknya zat yang akan kita pindahkan. Secara umum panjang dan diameter kolom memiliki perbandingan sekitar 8:1 serta daya penyerapkanya sekitar 25 sampai 30 kali berat bahan yang ingin dipisahkan. Teknik ini banyak digunakan dalam memisahkan senyawa-senyawa organic dan konstituen yang sulit menguap sedangkan dalam memisahkan jenis logam atau senyawa organic teknik ini jarang dipakai (Yazid, 2005).

Penggemasan kolom bisa dilakukan dengan dua acara yaitu dengan menggunakan cara basah ataupun menggunakan cara kering. Cara yang paling mudah kita gunakan adalah dengan cara  basah untuk mendapatkan packing yang memberikan pemisahan yang baik.  Sedangkan cara kering umumnya digunakan untuk alumina. Pada cara basah, fase diam dicampurkan terlebih dahulu dengan pelarut sebelum dituangkan kedalam tabung kolom. Sedangkan cara kering fase diam dituangkan terlebih dahuu kedalam tabung kolom, setelah itu baru dialiri fase gerak (Basset, 1994).

Menurut Alimin (2007), Ada beberapa keuntungan jika menggunakan metode kromatografi dalam pemisahan diantaranya adalah

a.       Dapat digunakan untuk sampel atau konstituen yang sangat kecil

b.      Cukup selektif dalam memisahkan senyawa-senyawa organic multi komponen

c.       Proses pemisahan dilakukan dalam waktu yang singkat

d.      Alat yang digunakan murah dan sederhana

V.                ALAT DAN BAHAN

Alat	Bahan
Pelat kaca kecil	Methanol
Kain lap	Silika gel (bubur silica/slurry)
Oven pengering	Air suling
Pita selotip	Larutan asam asetat
Gelas piala	Eter
Kertas saring	Benzena
Tabung reaksi	Tablet Kafein
Kaca besar	Petroleum eter
Batang pengaduk	Selulosa
Kolom kromatografi	Aseton
Rotary evaporator	sukrosa
	Pita berwarna
	Kalsium karbonat
	Cairan ekstrak obat
	Kristal iod

VI.              PROSEDUR KERJA

6.1  Kromatografi Lapis Tipis

6.1.1        Penyiapan Pelat

Pelat kaca kecil

èdibersihkan dengan air

èlalu dengan methanol

èdilap dengan kertas atau kain kering

èdikeringkan didalam oven pengering

èdisusun sebanyak 5 pelat diatas sebuah kaca besar

èdirekatkan kedua sisi deretan pelat keci dengan pita selotip

Gelas piala

èdimasukkan suspensi silika gel

èdicampurkan 5 gr bahan dan 10 ml methanol atau air suling

èditutup

èdisebarkan suspense diatas pelat

èdiratakan suspensi keseluruh permukaan kaca dengan bantuan batang pengaduk

èdisebarkan suspensi diatas pelat dengan satu gerakan

Oven pengering

èdikeringkan pelat dengan suhu 120^oC sekitar 10 menit

Hasil

6.1.2        Penyiapan Bejana

Gelas piala 100 ml

èdibuat larutan pengembang dengan komposisi methanol: asam asetat: eter: benzena (0,10: 1: 3: 5,9) ml sambil menunggu keringnya pelat

èdilapisi dinding dengan kertas saring

èditutup gelas piala dengan cawan petri agar linkungan dalam bejana jenuh dengan pelarut pengembang

Hasil

6.1.3        Penyiapan Contoh

Tabung reaksi

èdigerus 2 buah tablet yang mengandung kafein

èdiekstrak dengan 5 ml methanol

èdilarutankan 50 mg kafein standar dalam 1 ml methanol

Pipa gelas kapiler

èdiambil masing masing cairan ekstrak obat maupun larutan zat autentik

èdibubuhkan diatas pelat TLC dengan jarak kira-kira 1 cm satu sama lain dan 1 cm dari tepi pelat kaca

èdikeringkan noda sampel dan standar dengan dryer (ditiup)

èdibubuhkan lagi sampai 3-5 kali dengan setiap kali dikering

èdiusahakan membentuk noda pekat yang kecil

Hasil

6.1.4        Pengembangan

Bejana pengembang

èdimasukkan pelat

èdibiarkan proses ini berlangsung sampai garis dapat pelarut mencapai sekitar 1 cm dari tepi atas pelat

èdiangkat pelat dari bejana

èditandai garis depan pelarut dengan pensil lunak

èdikeringkan

Gelas piala

èdimasukkan pelat kedalam gelas piala yang berisi butiran kristal iod

èditunggu sampai pelat menampakkan noda

èdiangkat pelat dan ditandai segera lingkungan noda dengan pinsil

èdihitung dan bandingkan semua Rf yang diperoleh

Hasil

6.2  Kromatografi Kolom

6.2.1        Penyiapan Sampel

Lumpang

èdilumatkan 10 lembar contoh daun

èdirendam selama 1 jam dengan campuran 90 ml petroleum eter, 10 ml benzena dan 30 ml methanol

èdisaring

èdiekstraksi dengan 4 kali @ 50 ml

èdipisahkan lapisan organic

èdikeringkan lapisan ini dengan kristal Na-sulfat anhidrat

èdisaring lagi

Rotary

èdipekatkan lapisan organik sampai volume cairan tinggal beberapa milliliter

Hasil

6.2.2        Penyiapan Kolom

Kolom kromatografi

èdisiapkan dengan pipet tetes

èdisumbat bagian bawah kolom dengan glass wool

èdimasukkan suspense selulosa (dibuat dari 0,5 gr selulosa dalam 10 mL pelarut petrolium eter (PE) setinggi 3-4 cm

èdimasukkan suspensi kalsium karbonat sebanyak 1gr dalam 10 mL PE setinggi 3-4 cm

èdimasukkan juga suspensi sukrosa sebanyak 2 gr dalam 10 mL PE setinggi 3-4 cm

èdiberikan secara terus menerus pelarut selama penggemasan kolom

èdiletakkan gunting kertas saring diantara dan diatas timbunan penjerap

Hasil

6.2.3        Kromatografi

Kolom kromatografi

èsetelah permukaan pelarut turun mendekati penjerap, dimasukkan larutan sampe setinggi 1 cm

èdibilas bagian dalam kolom dengan pelarut campuran PE:aseton (6:1) jika sampel telah mendekati permukaan penjerap

èditeteskan secara terus menerus pelarut kedalam kolom

èdidapatlah pemisahan dengan melihat sejumlah pita yang berwarna

Tabung reaksi

èditampung tetesan yang keluar dari kolom

èdipisahkan berdasarkan warnanya

èdihentikan pemberian pelarut bila semua warna telah keluar dari kolom

Hasil

Video praktikum dapat dilihat pada link dibawah ini:
https://youtu.be/OZKuZ_w2Fg0ht
https://youtu.be/kQ1TxvFDLB8

Permasalahan:

1. Pada video percobaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT), mengapa eluen harus dijenuhkan terlebih dahulu?

2. Pada video percobaan kromatografi kolom, apakah silika gel bisa digantikan dengan bahan yang lain? 

3. Mengapa ujung buret harus disumbat dengan kapas terlebih dahulu sebelum dimasukkan silika gel? Dan apa yang terjadi jika kita tidak melakukan penyumbatan tersebut?